Como calcular os títulos de vírus

Colocar luvas, encha 10 tubos de cultura com 9 ml de caldo e rotulá-los "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3", e assim por diante, até que "10 ^ -10". Estes tubos serão utilizados para diluições em série virais. Desde vírus pode crescer para incrivelmente altas concentrações, é necessário diluí-los, a fim de contá-los de forma eficaz. Cada tubo representa uma diluição de dez vezes do vírus.

Tomar 1 ml da cultura de vírus que deseja titule e transferi-lo para o tubo intitulado "10 ^ -1" com uma pipeta. Misture bem o tubo. Esta é a sua primeira diluição de dez vezes.

Tomar 1 ml da cultura mista a partir do seu tubo rotulado "10 ^ -1" e transferi-lo com um novo pipeta para o tubo seguinte, identificada como "10 ^ -2." Misture bem este tubo.

Continue este padrão para criar uma série de diluição em série. Você vai acabar com 9 tubos de 9 ml e 1 tubo de 10 ml. As cargas virais em seus tubos será diluído em qualquer lugar de 10 vezes (o seu primeiro tubo) ou 100 vezes (o segundo tubo) a dez bilhões de vezes (o tubo final).

Tome 10 tubos de agar mole triptona e 10 placas de Petri e rotulá-los a se corresponder com seus tubos de diluição em série.

Solte as tampas de modo que eles não saltam no calor e, em seguida, coloque os tubos de ágar num copo de água fervente. Isso irá derreter o agar para que você pode derramá-la em placas de Petri.

Transfira os seus tubos para um conjunto banho de água quente a um mínimo de 45 graus Celsius. Isso irá garantir que o seu agar não solidifica nos tubos antes de ter uma chance de derramá-la em uma placa de Petri.

Adicionar duas gotas de cultura bacteriana no seu agar e misture delicadamente. Estas são as bactérias que serão mortos, o que lhe permite contar o número de partículas de vírus em uma solução particular.

Adicionar 1 ml de cada diluição em série com o seu tubo de agar correspondente, enquanto os tubos estão ainda no banho de água quente. Por exemplo, 1 ml da sua diluição ^ -1 série 10 deve ir para o tubo de agar rotulado de "10 ^ -1."

Misturar cada tubo e, em seguida, verter cada tubo para a placa de Petri, com o rótulo correspondente. Isto vai criar uma camada fina de agar, que foi inoculado com bactérias e vírus em cada placa. Deixe as placas crescer durante a noite numa incubadora.

Tire suas placas fora da incubadora e examiná-las. Você deverá ver áreas nubladas em toda a placa onde as bactérias têm crescido, com excepção de pequenas manchas claras chamadas placas. Estas placas são manchas de bactérias mortas, e cada placa representa um vírus.

Encontrar uma placa que tem entre 30 e 300 placas e contar o número exato de placas em que a placa.

Tome o número de placas em no seu prato e multiplicar por 10. Se você contados 157 placas, você obteria 1570.

Multiplique o número que você tem na etapa anterior pelo inverso do número em seu tubo de diluição. Por exemplo, se o prato selecionado foi a placa 10 ^ -5, você iria multiplicar 1570 por 10 ^ 5 para obter 157000000. Este número final é o título do vírus, e representa o número de vírus por mililitro de sua cultura original.