Os iniciadores, também conhecido como "oligos," são cadeias curtas de nucleótidos denominados oligonucleótidos que são utilizados como sequências de iniciação nas reacções de polimerase em cadeia (PCR). os iniciadores "base-pair" às extremidades da sequência que deseja copiar, fornecendo pontos de ligação 3`-end para nucleotídeos de entrada. Uma temperatura óptima de recozimento é baseada na composição dos iniciadores e permite o emparelhamento de bases de oligos específicos para a sua sequência de interesse. Vários métodos podem ser utilizados para calcular a temperatura de recozimento óptima, ou Ta.
Coisas que você precisa
- Papel
- Lápis
- Calculadora
Para Primers menos de 14 bases de comprimento
Adicione o número de guaninas e citosinas na sua sequência de primer, e em seguida, adicione-se o número de adeninas e timinas.
Multiplicar os guaninas totais acrescidos de citocinas por quatro, e multiplicar os adeninas totais acrescidos timinas por dois.
Adicionar os dois totais em conjunto para a temperatura de fusão (Tm) de seus iniciadores, e em seguida, subtrair cinco para óptima Ta. Assim, Ta = [4 (GC) + 2 (AT)] - 5.
Para Primers superior a 14 bases de comprimento
Localizar o número total de guaninas mais citosinas em seu primer.
Ligue os guaninas totais acrescidos de citocinas na fórmula fornecida pelo Promega: "Tm = 64,9 graus C + 41 graus C x (Número de G? S e C de no iniciador - 16,4) / N onde N é o comprimento do iniciador."
Subtraia cinco deste total para Ta. Assim, Ta = [64.9 graus C + 41 graus C (total G + C - 16,4) / N] - 5.
Use a fórmula simples em vez disso: Ta = 3 (guaninas totais acrescidos de citocinas) + 2 (adeninas totais acrescidos timinas).
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