Como solucionar um HPLC de duplo pico

cromatografia líquida de alta performance, ou por HPLC, é uma técnica utilizada para separar os compostos a partir de uma solução mista. Um tubo de metal cheia com esferas de sílica, chamado de uma coluna de HPLC, é usado para separar a solução antes de ser detectado pelo detector de HPLC. Um pico duplo a partir do detector de ler normalmente implica que alguma coisa está contaminando o sistema. Na maioria das vezes, o problema situa-se na coluna de HPLC.

  • Determinar que tipo de solvente está sendo injetado no sistema de HPLC. Se o solvente for mais forte do que a fase móvel líquida que passa no entanto, pode ocorrer divisão de pico. Uma solução rápida é a utilização do mesmo solvente na fase móvel como o solvente na amostra. Se o problema persistir, a coluna de HPLC pode estar contaminada.

  • Lavar a coluna por bombagem 100 por cento de metanol ou acetonitrilo, embora o sistema de HPLC, durante pelo menos 15 minutos. Isto irá remover materiais fortemente ligados vinculado à coluna. Inverta a coluna e efectuar o mesmo procedimento com o mesmo solvente. Este processo irá remover quaisquer partículas que possam ser entupimento da frita de um filtro-localizado na parte frontal da coluna. Se a cromatografia continua a apresentar picos duplos, a coluna foi contaminada com contaminantes fortes.

  • Com a coluna na direcção inversa, a bomba 25 ml de água a 1 mL por minuto. Em seguida, lavar a coluna com 25 ml de isopropanol, cloreto de metileno e hexano sucessivamente. Volte a ligar a coluna na direção correta e lavar a coluna com 25 ml de solvente fase móvel. Se o pico duplo continua a persistir, substitua a coluna.

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