Uma enzima é uma proteína que catalisa (aumenta a taxa de reacções químicas). A temperatura óptima da maior parte das enzimas, ou a temperatura a que as enzimas melhor facilitar as reacções, é entre 35 e 40 graus Celsius. O aumento da temperatura dentro desta janela aumenta a taxa de reacção, uma vez que excita as moléculas e aumenta a taxa a que as enzimas / reagentes colidem e reagem para fazer o produto. No entanto, o aumento da temperatura demasiado podem desnaturar a enzima e evitar que ele funcione em todos.
Determinar a temperatura óptima da enzima por aquecimento a reacção por quantidades infinitesmal e tendo pequenas amostras da reacção, para determinar quando a taxa máxima de produção de produto ocorre.
Coisas que você precisa
- Enzima
- Substrato
- kit de ensaio para o produto
- frasco de cintilação
- Taça
- placa de aquecimento
- Termômetro
Selecione um método. Determine como você está indo para medir a concentração do seu produto em vários pontos da experiência. Por exemplo, você pode medir a concentração de muitos produtos usando um espectrofotômetro e calcular a concentração a partir da absorvância, ou medindo a fluorescência e calcular a concentração de fluorescência.
Configurar a experiência. Coloque seus reagentes e enzima em um pequeno recipiente com uma tampa, tal como um frasco de cintilação. Reacção terá início. Coloque o frasco de cintilação num copo de água maior temperatura ambiente. Colocar o copo numa placa de aquecimento. Coloque um termômetro dentro do copo. Isto permite medir a temperatura da reacção em vários pontos.
Retirar uma amostra de 100 microlitros da reacção à temperatura ambiente, cerca de 25 graus Celsius. Vire a placa de aquecimento por diante. A várias temperaturas entre 30 e 40 graus Celsius (30,5, 31, 31,5, etc.) e de amostras de 100 microlitros da sua reacção.
Determinar a concentração do seu produto a cada temperatura. Quando a temperatura sobe acima de 40 graus Celsius, verá uma diminuição da taxa à qual o substrato é convertido em produto, porque a enzima é desnaturada. O ponto em que o produto está a ser produzido, à taxa máxima é o ponto em que a temperatura está no seu melhor.
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