As transferências de Northern são principalmente uma ferramenta na RNA pesquisa (ácido ribonucleico). O ARN é extraído a partir da amostra e corridos num gel de electroforese, que é então transferido para uma membrana de filtro. O tipo de RNA que é usado em transferências de Northern de ARNm é (ARN mensageiro), o produto de transcrição de ADN.
Interpretação dos resultados da hibridação de Northern blot inclui incubar o e lavá-lo para remover qualquer sonda não ligada, a fim de visualizar a sonda ligada.
Coisas que você precisa
- mRNA
- gel de electroforese
- RNase tampões de lavagem livre de baixa e de elevado rigor
- sonda marcada
Transferir a cadeia de ARNm do gel para a membrana. Incubar a mecha com um homólogo solução de sonda ao mRNA que você está usando. A sonda contém um indicador de seu RNA de interesse, a fim de visualizar mais tarde. Se os pares de bases da sonda são complementares, a sonda vai anexar ao seu mRNA.
Lave a vertente mRNA com RNase livres buffers de baixa e alta de rigor na lavagem para remover qualquer sonda não ligada.
Olhe para uma banda que se forma. Se se formar uma banda, que indica que o ARNm é homóloga da sonda. Se não há formas de banda, que indica que não é homóloga. Estes resultados indicam que no tipo de células ou tecidos seu ARN de interesse é o mais abundante.
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