cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) é um método comum de análise de laboratório em que uma amostra é separado nos seus constituintes químicos como é passa através de uma coluna. A coluna é enchida com um enchimento poroso tipicamente baseado em gel de sílica tratada. Uma coluna de fase reversa padrão, tais como um C8, pode por vezes tornar-se obstruídos ou contaminados. Tais colunas muitas vezes pode ser regenerado usando algumas técnicas simples.
Coisas que você precisa
- instrumento de HPLC
- água
- Metanol
- acetonitrilo
- isopropanol
- Cloreto de metileno
- hexano
Regenerar uma coluna
Retire a coluna contaminada e inverter a sua posição, de modo que a fase móvel está agora a entrar para o que é normalmente a saída da coluna. Anexar uma linha de saída para a outra extremidade da coluna (o fim que era originalmente a entrada), e executar isso em um recipiente de resíduos.
Bomba através de uma série de solventes, em ordem decrescente de polaridade. Uma série básica recomendado é começar com metanol, em seguida, progredir através de acetonitrilo, acetonitrilo / isopropanol (75:25), o isopropanol, o cloreto de metileno e hexano. Se a fase móvel originalmente sentado na coluna era um tampão, uma lavagem com água deve preceder o metanol. Um caudal de 1 a 2 mililitros por minuto é normalmente adequado, e cerca de 10 volumes de coluna cada um solvente deve ser bombeada através de. O volume da coluna é o espaço interno não ocupado por embalagem e é calculado como (0,7 x x pi (ID / 2) ^ 2 x G), em que ID é o diâmetro interno da coluna e L é o seu comprimento.
Bombear mais 10 volumes de coluna de isopropanol através da coluna para o preparar para utilização com a fase móvel inicial. Se a fase móvel inicial foi tamponada, também bombear água através da coluna, após o isopropanol antes de voltar para a fase tamponada original é móvel.
Desligar a coluna e inverter e a ligá-lo de modo que ele se encontra na sua configuração normal (isto é, com a fase móvel a ser bombeado para a entrada da coluna). Voltar a ligar a saída da coluna para o detector.
Como calcular o volume da coluna