Os inibidores de protease são enzimas que inibem as acções de proteases, que são determinadas enzimas que matam as proteínas no interior das células. Existem várias proteases que têm como alvo proteínas diferentes. Portanto, para preservar a funcionalidade de proteínas após a lise das células, uma combinação, ou cocktails, de inibidores de protease é utilizada. Estas informações estão disponíveis em solução, tablet ou em pó.
Coisas que você precisa
- PMSF
- Bestatin
- aprotinina
- leupeptina
- Pepstatin
- EDTA pH ~ 8
Inibidores da protease
Faça aprotinina, leupeptina e pepstatina na concentraions banco de 100um (micromolar).
A aprotinina é disponível sob a forma de solução numa concentração estoque de 100 mM.
Para fazer 1 ml (mililitros) de 100um, dissolver 1ul (microlitro) em 999ul de 1X PBS (solução de tampão fisiológico).
Leupeptina está disponível como um pó. peso molecular de Leupeptin é 475,6. Dissolver 100 ug (microgramas) de pó em 2 ml de água para fazer a concentração de ações de 100um.
Para fazer Pepstatin, dissolver 100ug de pepstatina pó em 1,45 ml de água para fazer uma concentração de ações de 100um.
Todos estes podem ser quer misturados em conjunto ou individualmente armazenado a menos 80 graus Celsius.
Adicione PMSF (fluoreto de fenilmetilsulfonilo) a 100 mM. PMSF vem sob a forma de pó. O peso molecular de PMSF é 174,19. Dissolver 10 mg de PMSF em 572 ul de 100 por cento de etanol e armazenar a 4 graus Celsius. É sensível à luz e deve ser conservado na escuridão.
Este é adicionado ao tampão de lise imediatamente antes da utilização.
Misturar as proteases em conjunto nas concentrações requeridas. Geralmente elas são diluídas por um factor de 100 para a utilização.
dicas & avisos
- cocktails comercialmente disponíveis de inibidores de protease economizar tempo e são fáceis de utilizar. Eles vêm na forma de comprimidos ou soluções.
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