Como calcular RNA Concentração

Terá de se multiplicar a absorvância, o factor de diluição e 40 & amp; micro-g / ml para se obter a concentração.

Quantificar a sua amostra de ARN através da medição da sua absorvância de luz ultravioleta (UV). Um espectrofotômetro nano-drop vai usar apenas um ou dois microlitros de sua amostra, o que você pode recuperar. Outros espectrofotómetros exigem uma amostra muito maiores. O coeficiente de extinção para os nucleótidos no comprimento de onda UV de 260 nm num percurso de luz de 1 cm é de 20. Com base nesta coeficiente de extinção, a absorvância de 40&micro-g / ml de ARN de acordo com as mesmas condições é um. Usando essas informações, você pode calcular a concentração de sua amostra de RNA.

Coisas que você precisa

espectrofotômetro

Calculadora

Fazer uma diluição, se necessário, da sua amostra. Uma diluição padrão para uma microcuvete é 1:40. Faça esta diluição por adição de 2&micro-G amostra de ARN de 78&micro-L de água estéril.
Seguir os protocolos do seu espectrofotómetro especial para calibrar a máquina, utilizando um branco e, em seguida, determinar a densidade óptica da sua amostra no comprimento de onda UV de 260 nm.
Multiplicar a absorção da sua amostra pelo seu factor de diluição em 40&MU-g de ARN / ml. A equação seria: "A concentração de RNA (&micro-g / ml) = (DO260) x (factor de diluição) x (40&micro-g de ARN / ml) / (uma DO260 unidade)" (Hofstra.edu) Por exemplo: Se você diluída sua amostra por 01:40 e sua leitura de absorvância foi de 0,08, você multiplicaria 0,08 x 40 x 40 = 128 &micro-g / ml = 0,13 &micro-g /&MU-G
Descobrir a pureza de sua amostra, tomando uma outra leitura de absorbância no comprimento de onda 280 nm UV. A relação de OD 260 / OD 280 irá indicar se - e em que nível - sua amostra está contaminada com proteínas ou fenol. Um resultado de 1,8 a 2,0 indica ARN qualidade.

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