Quais são as desvantagens de hplc?

Por causa da velocidade de HPLC e a dependência de diferentes polaridades dos compostos, dois compostos com estrutura semelhante e polaridades pode sair do aparelho de cromatografia, ao mesmo tempo ou cerca do mesmo tempo. Isto é conhecido como co-eluição. Coeluição torna determinar exatamente qual parte da mistura eluída em que ponto difícil.

HPLC tipicamente utiliza uma coluna de vidro cheia com grânulos feitos de materiais diferentes. As misturas de ser forçado através da coluna ter produtos químicos que se ligam com diferentes dosagens para os grânulos. A força da ligação, o que depende da similaridade em polaridade, determina durante quanto tempo o produto químico irá ligar-se ao cordão antes de ser libertado. Alguns compostos ligam-se fortemente de modo que, essencialmente, nunca são libertadas das contas em coluna e nunca são medidos na solução que sai da coluna.

técnicas de separação típicas envolvem o laboratório o desenvolvimento de um ensaio, ou método de separação e, em seguida aplicação de ensaio que para separar compostos individuais a partir de uma solução. No entanto, isto resulta geralmente em várias soluções que também têm de ser sujeitos procedimentos, levando a um aumento exponencial na complexidade. Embora HPLC muitas vezes pode simplificar e acelerar este processo, o custo de desenvolver um aparelho HPLC pode tornar-se tremendo. Desenvolvimento de um aparelho HPLC, embora muito mais eficiente, é muito mais caro do que desenvolver outros ensaios para a separação de compostos. Isto faz com que não é financeiramente viável para muitos laboratórios pequenas propriedade privada.

HPLC é utilizada não só para separar compostos simples, é usado também para isolar proteínas específicas a partir de uma mistura celular. Neste caso, os grânulos na coluna são geralmente revestidos com um anticorpo específico para a proteína é necessário recolher. As proteínas ligam-se a anticorpos e a restante solução é passada através da coluna, em seguida, as proteínas são libertadas utilizando outra solução e recolhido. Isso requer um técnico altamente qualificado para monitorar a coluna em todos os momentos e certifique-se de que o processo está sendo executado exatamente como planejado.