Como a análise de electroforese

Verifique se o seu caderno de laboratório para determinar quais as amostras foram carregadas em que pistas. Quando você carregou os poços para o seu gel, você deve ter notado a identidade de cada pista / sample.

Determinar qual a faixa contém a "escada" de padrões de ADN. Estes fragmentos são de conhecida Length- sua distância de migração podem ser usadas para determinar o tamanho dos fragmentos de amostra.

Usando uma régua, medir a distância da sua imagem a partir dos poços, para o corante de rastreio, que terá percorrido mais do que qualquer uma das bandas de ADN (em outras palavras, será na parte inferior do gel). Grave este número - as unidades que você usa não são importantes.

Medir a distância sobre a imagem a partir dos poços, para cada uma das bandas no "escada," em seguida, divida essa distância pela distância percorrida pela banda de rastreamento corante. Este cálculo dá-lhe a mobilidade relativa de cada banda.

Exemplo: Suponhamos que a banda de rastreamento corante viajou 6 polegadas e temos três bandas que viajaram 5, 4,5 e 3,5 polegadas. Qual é a sua mobilidade relativa?

Resposta: Nós dividimos 5, 4,5 e 3,5 por 6 para obter mobilidades relativas de 0,833, 0,75 e 0,5833.

Indique as mobilidades relativas ao seu programa de planilha eletrônica (Excel ou qualquer outro programa similar que você usa), juntamente com o tamanho em kilobases de cada fragmento na escada. (O fabricante dá-lhe o tamanho de cada fragmento nas escadas que fornecem, então você já deve ter esta informação.)

Representar graficamente os dados com mobilidade relativa à x e tamanho em kilobases no y.

Use a função Trendline em seu programa de planilha para se ajustar uma equação para os dados. Esta equação deve ser uma equação de poder (por exemplo x ^ -2) e deve ajustar os dados relativamente bem (R-coeficiente de pelo menos 0,9).

Olhe para as bandas correspondentes a suas amostras. Lembre-se que fragmentos de DNA menores viajar mais longe através do gel do que grandes fragmentos de DNA, por isso os mais próximos ao corante de rastreamento será o menor. Note-se, contudo, que se o plasmídeo de DNA (circular) é sem cortes, ele se tornará "supercoiled" ou torcido como um fio de telefone, o que vai realmente fazer com que viajar mais longe do que o DNA linear do mesmo tamanho. Da mesma forma, uma "entalhado" plasmídeo que foi incompletamente corte irá percorrer uma distância mais curta do que o ADN linear do mesmo tamanho. Consequentemente, não é possível estimar o tamanho de plasmídeos sem cortes a partir do seu gel.

Igualar-se as bandas em cada pista com a identidade da amostra que colocou nessa via e determinar se o que você vê é o que você poderia esperar. Isso vai depender da natureza da sua experiência. Em geral, no entanto, se você digerido um plasmídeo de inserção com duas enzimas de restrição, que seria de esperar a inserção seria libertado da plasmídeos uma vez que é muito menor do que o plasmídeo, que seria de esperar para ver duas bandas em que pista, um perto o topo e o outro para baixo perto do fundo. Um plasmídeo cortado com uma enzima de restrição única deve constituir apenas uma única banda que se desloca um pouco mais do que o plasmídeo de corte com duas enzimas de restrição, mas longe de ser tão longe como a inserção.

Medir a distância entre os poços ao plasmídeo cortado e inserir faixas com a sua régua. Dividir estes números por a distância percorrida pelo corante de rastreio para encontrar a mobilidade relativa dos insertos de corte e plasmídeos.

Ligue a mobilidade relativa de inserções e plasmídeos corte na equação o seu programa de planilha calculada para você. Este cálculo deve dar-lhe uma estimativa do tamanho destes plasmídeos.