Um espectrofotómetro é utilizado para determinar a concentração de certos compostos, tais como proteínas, em solução. Em geral, uma luz brilha através de uma cuvete cheia com uma amostra. A quantidade de luz que é absorvida pela amostra é medida. Desde compostos absorvem luz em diferentes faixas espectrais, o comprimento de onda certo deve ser definida para a análise. Existem inúmeras maneiras de calcular a concentração de amostras desconhecidas através de espectrofotometria, no entanto, utilizando padrões de referência dá a melhor precisão. Além disso, as normas também indicam se o espectrofotômetro é mau funcionamento ou outros problemas com a análise.
Coisas que você precisa
- espectrofotômetro
- Os padrões de referência
- amostras desconhecidas
- Excel, planilha ou software gráfico
Cálculo através de equações linha reta
Analisar os padrões de referência no início da análise. Normas são conhecidos concentrações e são usados para calibrar o equipamento e verificar a precisão. Todas as amostras devem estar dentro da faixa de trabalho dos padrões. Se não, então amostras terá de ser diluído ou a concentração dos padrões aumentada.
Faça um gráfico de dispersão ou gráfico de linha com as leituras de concentração e absorção padrão. A concentração será no eixo dos y, a capacidade de absorção no eixo dos x. Por exemplo, as normas são de 1 ppm, 2,5 ppm e 5 ppm. A absorvência foi determinada a 1 ppm = 0,25, 2,5 ppm = 0,5, e 5 ppm = 0,75.
Formatar a linha de tendência para exibir uma equação no gráfico. A equação mostrará a fórmula y = mx + b. Por exemplo, usando os padrões no passo 2 a equação é y = 0,1531 + .1224x. A maioria das linhas de tendência são interceptados no zero, mas isso depende do método analítico e valor de R-quadrado.
Analisar amostras desconhecidas e leituras registro de absorção.
Use a equação (y = mx + b) para determinar a concentração de amostras.
Compreender Linha reta Equação
Deixei "Y" igualar a concentração de. Isto é o que será resolvido para.
Deixei "X" igual à capacidade de absorção da amostra. Esta é a absorvência medida pelo espectrofotómetro.
Permitir "" para igualar a inclinação e "b" para igualar o y. Ambos são dadas, no entanto, se a linha de tendência foi forçada através de 0, então "b" será 0.
Resolver para a concentração. Usando o exemplo no passo 3, substituto "X" como uma determinada capacidade de absorção de 0,563. Portanto:
y = 0,1224 (0,563) 0,1531 +
Y (concentração) = 0,222011
dicas & avisos
- As unidades de concentração será o mesmo que os padrões. Por exemplo, as unidades são partes por milhão (ppm) ou partes por bilião (ppb).
- Os padrões de referência e as amostras são facilmente contaminado.
- Sempre leia todas as partes do ensaio ou método antes de desenvolver.
Como para o cálculo da concentração, utilizando absorvância
Como para calcular a concentração de bicarbonato
Como interpretar os dados de ftir
Como para calcular a força iónica de uma solução
Como calcular o ponto final
Como calcular factores de resposta gc
Como o gráfico de massa e densidade