Vantagens e desvantagens de western blot

Um dos maiores argumentos a favor de western blot é a sua sensibilidade. Devido à sua capacidade para detectar tão pouco como 0,1 nanogramas de proteína numa amostra, a técnica pode, teoricamente, servir como uma ferramenta de diagnóstico precoce eficaz, sentindo a menor resposta imunogénica de um vírus ou bactéria numa amostra do doente. Um Western blot indirecto adicional baseia-se esta sensibilidade da capacidade do anticorpo secundário para amplificar a intensidade do sinal detectado pelo sistema de imagiologia. Maior sensibilidade significa que menos anticorpos são necessários para o teste, o que reduz os custos de laboratório significativamente.

A técnica de western blot deve a sua especificidade a dois factores que contribuem grandes. Em primeiro lugar, electroforese em gel de classifica uma amostra em proteínas de diferentes tamanhos, carga, e conformação. Este processo é, em si, um grande passo para a detecção, como bandas formadas no gel já dar pistas sobre o tamanho da proteína ou do polipéptido de interesse. A especificidade da interacção anticorpo-antigénio serve como o segundo factor de grande. Uma vez que os anticorpos específicos mostram afinidade para proteínas específicas, o processo pode detectar selectivamente uma proteína alvo, mesmo numa mistura de 300.000 proteínas diferentes.

Apesar de sua sensibilidade e especificidade, um western blot ainda pode produzir resultados errados. A resultados falso-positivos quando um anticorpo reage com uma proteína não-pretendido, que é o que acontece frequentemente quando um doente a ser testado para o HIV acontece com tuberculose ou de uma série de infecções parasitárias. Um falso-negativo, por outro lado, pode resultar facilmente se as proteínas maiores não têm tempo suficiente para transferir adequadamente à membrana. blotting e processamento inadequado, muitas vezes produzir enviesada, desvanecido, ou mesmo várias bandas, tornando os resultados do teste sujeita à interpretação do técnico.

O custo de um western blot é um compósito dos grandes gastos individuais para os anticorpos etiquetados, analistas qualificados e equipamentos de laboratório. Um processo delicado, western blot exige precisão em todas as etapas para a identificação correta dos componentes de uma amostra. Um pequeno erro na concentração do reagente ou em período de incubação pode ser desastroso para todo o processo. Finalmente, o equipamento necessário para a detecção e tratamento de imagens - quimioluminescente,, radioativo, ou sistemas de detecção de laser fluorescentes - pode ser demasiado caro para a unidade média microbiologia.