A electroforese em gel é uma técnica em que as moléculas biológicas são separados uns dos outros e identificada na investigação biológica ou diagnósticos médicos. Desde o seu desenvolvimento na década de 1970, estas técnicas têm sido inestimável na identificação de genes (DNA) e produtos de genes (RNA e proteínas) de interesse de pesquisa. Nos últimos anos, novas técnicas surgiram para dar maior especificidade e detalhes sobre o que está acontecendo em sistemas vivos. Enquanto estas não têm suplantado técnicas de electroforese, e manipulações avançadas possível alargar a viabilidade da técnica, é importante perceber o que eletroforese em gel pode e não pode fazer.
Electrophorresis Tem Análise amostra limitada
Eletroforese é específica para qualquer tecido que você já experimentou. Por exemplo, se você executar um Southern blot (um tipo de eletroforese) em um cotonete bucal, você está olhando para os genes das células epiteliais da sua bochecha e em nenhum outro lugar em seu corpo. Às vezes, isso pode ser benéfico, mas os pesquisadores estão frequentemente interessados em efeitos mais generalizados.
As técnicas tais como hibridação in situ (ISH) pode ter uma secção de tecido e analisar a expressão do gene em cada pequena área da referida amostra. Assim, os pesquisadores podem olhar para todas as áreas do cérebro em uma amostra com ISH, enquanto técnicas de electroforese pode apenas olhar para algumas áreas de cada vez.
Medidas de eletroforese não são precisos
A electroforese em gel pode separar eficazmente as proteínas semelhantes com diferentes pesos (esta é uma técnica chamada de Western blotting). Ele pode separá-los mais precisamente através de uma técnica conhecida como 2d electrophoresis- isso é comum em proteômica.
Infelizmente, todas as medições efectuadas a partir desta técnica são semi-quantitativa na melhor das hipóteses. A fim de obter a massa exacta (em peso) de proteínas, espectroscopia de massa deve ser empregue após a proteína foi purificado por electroforese. Além disso, comparando as quantidades relativas de moléculas diferentes baseia-se na densidade de banda (escuridão) de diferentes pontos no gel. Este método tem algum grau de erro, e as amostras são geralmente executados várias vezes para obter resultados limpas.
Substancial inicial da amostra é necessária
A electroforese é uma técnica de isolar e identificar visualmente diferentes biomoléculas. Isto é feito por passagem de uma corrente eléctrica através do gel para separar moléculas carregadas de diferentes pesos. Se a molécula você estiver interessado em não é comum o suficiente, sua banda vai ser praticamente invisível e difícil de medir.
ADN e ARN podem ser amplificados antes de executar um pouco electroforese, mas não é prático fazer isso com proteínas. Portanto, uma amostra de tecido grande é necessária para executar estes ensaios. Isto pode limitar a utilidade da técnica, especialmente na análise médica. É virtualmente impossível para executar electroforese em amostras a partir de um único citometria de fluxo e imuno-histoquímica estão cell- mais vulgarmente usado para avaliar a expressão de célula-por-célula das proteínas. Uma técnica chamada PCR é excelente para medir com precisão pequenas quantidades de RNA.
Somente certas moléculas podem ser visualizados
Eletroforese é excelente para separar e identificar médio e biomoléculas de grande porte. No entanto, muitas das moléculas que os investigadores desejam olhar são pequenas hormonas SMALLER-, neurotransmissores, e os iões não pode ser medido por electroforese. Isto por duas razões: eles não reagir adequadamente com a preparação eletroforese (geralmente uma técnica chamada SDS PAGE) e, mesmo que eles fizeram, eles são muito pequenos para separar corretamente e corria para fora do fundo do gel. Estas moléculas são, em vez medido por meio de técnicas, tais como imunoensaios RIAAs (rádio) e ELISA (ensaio imunossorvente ligado a enzima).
Eletroforese é baixa taxa de transferência
eletroforese em gel é geralmente baixo rendimento, o que significa que não produz dados de forma particularmente rápida. Contraste eletroforese, onde você pode olhar para um pequeno punhado de moléculas de RNA de cada vez, com PCR (reação em cadeia da polimerase), que pode avaliar simultaneamente milhares de amostras. Da mesma forma, a citometria de fluxo pode fazer medições de milhares de células individuais e fazer correlações complexas, enquanto eletroforese olha para células em massa e não pode fazer tais discriminações finas. PCR e citometria de fluxo representam maciçamente processos seriais e paralelas, respectivamente, e ambos ultrapassam muito as habilidades de eletroforese para gerar dados de pesquisa.
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