Componentes básicos de uma hplc

A fim de ser injectada na coluna de HPLC, uma amostra deve ser primeiro dissolvido num solvente polar líquido, de preferência um com espectros de HPLC conhecida de modo a que os dados podem ser distinguidas a partir da amostra de. A solução líquida contendo a amostra é colocado no instrumento e é enviada para a coluna. A localização real do local de injecção depende do tipo de instrumentos. Na maioria dos casos, o processo de injecção é automatizado, mas em alguns casos, um técnico de laboratório deve injectar a amostra, utilizando uma agulha de seringa de pequeno porte.

O componente de bomba da unidade de HPLC é necessário porque fornece a pressão que impele a amostra através da coluna. Bomba força varia, mas um potente pode-se produzir uma pressão de até 6000 psi, ou libras por polegada quadrada, o qual é aplicado após a amostra é injectada. Isto permite que a amostra passe através da coluna de forma mais rápida e eficiente do que se fosse para escorrer através do uso de apenas a força da gravidade.

O aumento da velocidade de uma amostra passou através da coluna por uma bomba permite o uso de um tipo diferente de coluna do que as utilizadas em cromatografia líquida simples. O material de embalagem na coluna pode ter um tamanho de partículas muito menor, o que aumenta a área de superfície e, por conseguinte, ajuda interacções da amostra com a coluna. A maioria das colunas de HPLC de trabalho através de polaridade. A amostra é dissolvida num solvente polar, e a coluna é constituída de hidrocarbonetos em grande parte não-polares. As partes polares da molécula de amostra passa através da coluna muito rapidamente porque são principalmente interagir com o solvente, ao passo que os componentes não polares da amostra permanecer na coluna, formando interacções fracas com os componentes de coluna. Portanto, os componentes da amostra vir a sair da coluna, a fim de mais polar para a maior parte não polar.

Os detectores também variar com base no tipo de instrumento de HPLC sendo utilizados. No entanto, a maioria funcionam da mesma maneira básica. Uma fonte de luz ultravioleta incide sobre os componentes da amostra separadas como eles saem da coluna. A maioria dos compostos orgânicos absorver uma certa quantidade de luz, de modo que à medida que passam pelo feixe de luz aplicada, um detector pode escolher-se a quantidade de luz é absorvida. O detector também regista o tempo de retenção dos componentes com base na ordem pela qual eles saem da coluna. Esta saída pode então ser analisada com base na área do pico para determinar a natureza exacta dos componentes da amostra.