As bactérias são ferramentas úteis na modificação genética. Através da utilização de plasmídeos, porções circulares de ADN bacteriano permutáveis, organismos, tais como outras bactérias, pode ser transformada geneticamente. Este guia descreve os métodos básicos envolvidos na utilização de bactérias para a engenharia genética de um outro organismo.
Coisas que você precisa
- espécies de bactérias não-letais (de preferência uma variante inofensiva de Escherichia coli)
- espécies segunda bactéria não letais
- placa de Petri
- incubadora de bactérias
- As enzimas de restrição para o gene alvo
- 2 laços estéreis
- banho de água quente
- Tubo de ensaio
Preparando o gene de interesse
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Obter uma amostra das primeiras espécies de bactérias por raspagem da colônia fechado com uma ansa estéril.
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Agite a malha inoculada num tubo de ensaio através de um banho de água a cerca de 48 graus Celsius durante cinco segundos.
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Adicionar algumas gotas de enzima de restrição para o tubo de ensaio e aquecido, ciclo inoculado. Este enzima de restrição varia dependendo do gene de interesse que será transferido para as outras espécies bacterianas.
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Mergulhar uma segunda ansa estéril para uma colónia da segunda espécie de bactérias, o que é para ser transformada.
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Espalhe as bactérias de forma uniforme através de uma placa de Petri contendo meio de agarose, fazendo deslizar o loop inoculado através da agarose.
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Deixe as bactérias incubar durante dois dias numa incubadora, de tal modo que as colónias bacterianas são formados.
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Adicionar a mistura criada anteriormente, contendo o gene de interesse para a placa de Petri contendo as colónias de bactérias.
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Deixe as bactérias incubar durante dois dias na incubadora. Isto permite que as espécies de absorção dos genes adicionados ao prato e inseri-los nos seus genomas.
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Conceber um método para testar as bactérias transformadas para ver se eles assimilado os genes. Por exemplo, se o gene adicionado concede as bactérias resistentes a antibióticos, que pode ser prático para adicionar discos de ampicilina para a placa de agar. Se sobreviverem, eles pegaram o gene.
Transformar as outras espécies de bactérias
dicas & avisos
- Ao escolher um gene a ser usado para a transformação, escolher um gene que pode ser feita a partir de uma outra bactéria facilmente.
- Também não se esqueça de escolher um gene que pode ser testado para ver se o procedimento funcionou. Por exemplo, um gene que faz com que as bactérias brilhar é facilmente verificável pela vista.
- Tenha muito cuidado quando se trabalha com bactérias, letais ou não letais.
- Lavar as mãos com sabonete antibacteriano antes, durante e depois de qualquer trabalho com a bactéria em engenharia genética.
recursos
- Crédito da foto https://vedicsciences.net/design/bacteria5.jpg
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