Os nossos genes codificam proteínas que são usadas em nossas células para realizar funções tais como o metabolismo de energia, a biossíntese e a divisão celular. As proteínas são construídos a partir de aminoácidos ligados por ligações peptídicas. "Tradução" é um processo pelo qual um ácido ribonucleico mensageiro (ARNm), que é basicamente uma cópia do gene indivíduo, é utilizado como um molde para construir uma proteína. Na natureza, a tradução da proteína acontece dentro de uma célula viva, mas os biólogos moleculares aprenderam a produzir proteínas no laboratório. Esta técnica é usada para a rápida identificação de produtos de genes, estudos de proteína de dobragem, estudos de mutação, e estudos funcionais.
Coisas que você precisa
- seu mRNA
- Sistema de coelho ligado de reticulócitos
- Aminoácido metionina Mistura menos
- Aminoácido Leucina Mistura menos
- RNasin
- Transcend tRNA
- Pipetas e dicas
- tubo de microcentrífuga
Combinar todos os seus componentes num tubo de microcentrífuga: Pipetar 35 microlitros coelho lisado de reticulócitos Sistema, 0,5 microlitros das misturas de aminoácidos, um microlitro de RNasin, 2 microlitros de ARNm e 1 microlitro de ARNt em conjunto, e misturar. O coelho de reticulócitos Lysate sistema inclui todas as moléculas que são encontradas dentro de nossas células e necessários para a tradução, incluindo ribossomas e fatores de iniciação. Esta etapa irá preparar tudo pronto para a tradução. Sua molécula de mRNA atribui a um ribossomo, e os fatores de iniciação montar. Moléculas chamadas tRNAs são associados com seus aminoácidos e está pronto para construir a proteína.
Aquece-se a mistura de reacção a 30 graus Celsius. A tradução irá começar durante este passo. A mensagem no ARNm é "ler" por os ARNt. Cada ARNt transporta um aminoácido, e estes aminoácidos são unidos em conjunto para formar a proteína.
Esperar 90 minutos para a tradução para prosseguir. Os ARNt manter trazer novos ácidos aminados de acordo com a mensagem de ARNm. Uma vez que o ARNm é totalmente ler, a tradução termina e a proteína está pronto.
Purifica-se o seu proteína por SDS-PAGE. Ele está pronto para testes funcionais.
dicas & avisos
- técnicas de clonagem molecular são sensíveis e necessitam de um ambiente estéril. Usar luvas e uma bata de laboratório.
- Não comer ou beber nada durante o trabalho no laboratório.
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