Fontes de erro em eletroforese em gel

A electroforese em gel envolve a utilização de um gel geralmente feito de polímeros, tais como agarose. O gel é imerso numa solução tampão que conduz a um campo eléctrico. A amostra de ADN de interesse é primeiro fragmentados utilizando enzimas de restrição e é então injectado no gel. Quando o campo eléctrico é ligado, os fragmentos de ADN no gel migrar em direcção ao eléctrodo positivo. Se os fragmentos de ADN são de tamanhos diferentes, então os tempos de migração será diferente para cada tamanho de fragmento. Os fragmentos são então visualizadas utilizando um corante ou autorradiografia e são visíveis como bandas no gel.

A principal aplicação da electroforese é como uma ferramenta para a análise de DNA em biologia molecular, mas também é usado em medicina forense, como um meio de identificar amostras a partir de uma cena de crime. É importante que as fontes de erros nesta técnica ser minimizada, a fim de obter resultados precisos. Uma fonte de erro é a contaminação da amostra de ADN. Se houver ADN estranho na amostra, o gel terá mais bandas do que seria encontrado em um gel que contém apenas a amostra purificada.

A concentração do gel também tem de estar correcto para evitar erros. Se a concentração for demasiado elevada ou demasiado baixa, os fragmentos irão migrar ou muito lentamente ou muito rapidamente. Isto irá levar a erros em resolver as diferentes bandas. Durante a eletroforese de execução, deve ser tomado cuidado para assegurar que a tensão é constante. Quaisquer flutuações na tensão resultará em migração instável de fragmentos de ADN, conduzindo a erros na leitura das bandas. A solução tampão deve também ser de composição correcta, tal como um tampão com o pH errado ou concentração iónica vai alterar a forma dos fragmentos de ADN, alterando também as suas tempos de migração.

Mais importante ainda, o gel deve ser visualizado adequadamente. Se a concentração do corante ou sonda radioactiva utilizada para visualizar as amostras é demasiado elevada, a imagem resultante será muito sujo, como fragmentos residuais também vai ser visualizado. Se a concentração do gel é demasiado baixa, não haverá visualização. Quando os processos adequados foram seguidos durante todas as fases, electroforese em gel irá produzir resultados que são precisos e podem ser utilizados com grande confiança. Tal como acontece com todos os procedimentos científicos, eletroforese em gel pode ser propenso a erros, mas estes podem ser minimizados com a preparação e manuseamento correcto.